镜检组织的冻干按下述步骤进行。
(1)冻结软的动物组织应先用明胶包在组织周围,采用双刃刀片切成厚度在1mm以下的薄片,将其放在金属片上快速投人用液氨冷到一150℃左右的冷风中,瞬间就会冻结,这时试料的冷却速率约为10℃/min。
(2)于燥在预先冷却到一50℃以下的试料台上,移动冻结试料,迅速抽真空排气开始干燥。干燥过程中,试料的温度希望低于再结晶或抑制冰晶生长的温度。但从冰的蒸气压来看,在10~3Pa的真空中,温度在一90℃以下,冰无法升华,即使在一80℃左右,也被认为是极限升华温度,因此生物组织冻干时一般将制品冷却到一70℃左右。至于试料温度和干燥速率的关系,用斯梯芬森图表示。从该图可知,随升华温度的降低干燥时间急剧增加。
由于干燥的水分是微量的,因此决定干燥终点是困难的。一般是按经验或者推定来决定干燥的终点。表7-7列出了一些材料的干燥时间参考值。
(3)包埋显微镜的标本可不用石蜡包埋,而用于电子显微镜的标本需用树脂包埋。预先将树脂熔化并排除气体,而后在其中放入干燥完了的试料。如果包埋剂和试料没有很好地排气,在真空中就有起泡的危险。
(4)切片包埋完毕,从真空中取出,再按-一定形式切片、染色,最后进行镜检。